2 × ටැක් ප්ලැටිනම් පීසීආර් මිශ්‍රණය
ක්රියාකාරකම් අර්ථ දැක්වීම
1 ඒකකය (යූ) ටැක් ප්ලැටිනම් ඩීඑන්ඒ පොලිමරේස් ක්‍රියාකාරකම යනුවෙන් හැඳින්වෙන්නේ සක්‍රීය සැමන් ශුක්‍රාණු ඩීඑන්ඒ සැකිල්ල/ප්‍රාථමිකය ලෙස මිනිත්තු 30 ක් ඇතුළත මිනිත්තු 30 ක් ඇතුළත ඇසිඩ්-ද්‍රාව්‍ය නොවන ද්‍රව්‍ය බවට එන්සයිමල් 10 ක් එකතු කිරීම සඳහා අවශ්‍ය එන්සයිම ප්‍රමාණය ලෙස ය.
තත්ත්ව පාලනය
එස්ඩීඑස්-පේජ් හඳුනා ගැනීමෙන් සංශුද්ධතාවය 99%ට වඩා වැඩිය; බාහිර න්‍යෂ්ටියේ ක්‍රියාකාරිත්වය අනාවරණය නොවේ; මානව ජෙනෝමයේ ඇති තනි පිටපත් ජානය ඵලදායීව විස්තාරනය කළ හැකිය; සතියක් කාමර උෂ්ණත්වයේ ගබඩා කළ විට සැලකිය යුතු ක්රියාකාරකම් වෙනසක් සිදු නොවේ.
ප්රධාන තාක්ෂණික පරාමිතීන්
එයට 5′-3 ′ එක්ස්‌යුනියුක්ලීස් ක්රියාකාරකම් සහ 3′-5 ′ එක්ස්‌යුනියුක්ලීස් ක්රියාකාරකම් ඇති අතර එහි විශ්වාසවන්තභාවය පෆු පොලිමරේස් අසල වේ. ටැක් ප්ලැටිනම් පොලිමරේස් වල ව්‍යාප්ති වේගය පීඑෆ්යු පොලිමරේස් වලට වඩා වේගවත් වන අතර විස්තාරණ කාර්යක්ෂමතාව ඉහළ ය. පීසීආර් නිෂ්පාදන කෙලින්ම කෙලවරකට සම්බන්ධ කිරීමට හෝ ටීඒ දෛශිකයෙන් ක්ලෝන ගත හැකිය. ක්ලෝන කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව වැඩිදියුණු කළ යුතු නම්, ටීඒ දෛශිකයට ක්ලෝන කිරීමට පෙර පළමුව පවිත්‍ර කර 3'-ඩීඒ එකතු කිරීම රෙකමදාරු කරනු ලැබේ.
එක් ටියුබ් ටැක් ප්ලැටිනම් මාස්ටර්මික්ස් (ජාතික උසස් තාක්‍ෂණ නිෂ්පාදන සහතික කිරීම)
Ta ටැක් ප්ලැටිනම් මාස්ටර්මික්ස් විසින් පීසීආර් ප්‍රතික්‍රියාවේ නිශ්චිතභාවය සහ සංවේදීතාව වැඩි දියුණු කර ඇති අතර උසස් ජීසී අන්තර්ගතය, ද්විතීයික ව්‍යුහය සහ ඒ හා සමාන සංකීර්ණ සැකිලි වැඩි කළ හැකිය. ඉලක්ක ගත අච්චුවේ පිටපත් 2 ක් තරම් අඩු ප්‍රමාණයකින් වැඩි කළ හැකි අතර වඩාත් නිවැරදි පර්යේෂණාත්මක ප්‍රතිඵල සහතික කෙරේ.
අද්විතීය ටැක් ප්ලැටිනම් මාස්ටර්මික්ස් සූත්‍රය මඟින් සමස්ත ප්‍රතික්‍රියා පද්ධතියම ඉතා ස්ථායී වන අතර නැවත නැවත කැටි ගැසීම හෝ 4 ° C දී දිගු කාලීනව ගබඩා කිරීම හේතුවෙන් ක්‍රියාකාරිත්වයට බලපෑමක් සිදු නොවේ.
Stable ස්ථායි සහ කාර්‍යක්‍ෂමව පෙර සූදානම් කළ පීසීආර් මිශ්‍ර ද්‍රාවණය මඟින් ක්‍රියාවලිය වේගවත් හා සරල කළ හැකි අතර එමඟින් ශ්‍රම තීව්‍රතාවය සහ නියැදි දෝෂය බොහෝ සෙයින් අඩු වේ. ඉහළ කාර්යසාධනයක් සහිත පීසීආර් වර්ධක සහ ප්‍රශස්තකාරක ද මිශ්‍රණයට ඇතුළත් කර ඇති අතර එමඟින් පීසීආර් කොන්දේසි මත අවශ්‍යතා අඩු වේ.
මෙම නිෂ්පාදනයට සායම් අඩංගු සහ සායම් රහිත පද්ධති ඇත. ඩයර් අඩංගු මාස්ටර්මික්ස් නිෂ්පාදන, පීසීආර් පසු සෘජුවම ඉලෙක්ට්‍රෝෆෝරස් කළ හැකි අතර, බෆරය පැටවීමකින් තොරව.
අයදුම්පත්
ජෙනෝම් වැනි සංකීර්ණ සැකිලි වලින් ඉහළ විශ්වාසවන්ත නිෂ්පාදන වැඩි දියුණු කිරීම සඳහා එයට පීඑෆ්යු පොලිමරේස් ආදේශ කළ හැකි අතර ප්‍රකාශන ජාන ක්ලෝන කිරීම, අඩවි විශේෂිත විකෘති කිරීම් සහ ඒකීය නියුක්ලියෝටයිඩ බහුරූපතාව විශ්ලේෂණය (එස්එන්පී) වැනි යෙදුම් සඳහා එය සුදුසු ය.
PCR ප්‍රයිමර් සැලසුම් කිරීමේදී ගත යුතු පූර්වාරක්ෂාවන්:
ප්‍රයිමර් දිග සාමාන්‍යයෙන් 20-25 මෙර් වේ. කෙසේ වෙතත්, දිගු පීසීආර් පීසීආර් ක්‍රියාත්මක කිරීමේදී ප්‍රයිමර් දිග මර් 30-35 දක්වා වැඩි කළ යුතුය.
ප්‍රයිමර් දෙක අතර අනුපූරක යුගලයක් නොමැත, විශේෂයෙන් 3 ′ අවසානයේ ඇති අවසාන කඳවුරු 3 සඳහා.
C ජීසී අන්තර්ගතය 50-60%ක් විය යුතු අතර දේශීය පොහොසත් ජීසී හෝ ඒටී වලින් වළකින්න. ප්‍රයිමර් සහ සැකිලි ස්ථාවර ලෙස බන්ධනය කර ගැනීම සඳහා, 3. අවසානයේ පොහොසත් ව්‍යුහයෙන් වළකින්න.
Secondary ද්විතියික ව්‍යුහය සෑදීම සඳහා ප්‍රයිමර් වළක්වා ගන්න.
M එකිනෙකාට සමීප ටීඑම් උෂ්ණත්වයක් සහිත ප්‍රාථමික දෙකක් තෝරන්න.
PCR සඳහා ප්‍රාථමික වල ටීඑම් අගය ගණනය කිරීම:
ප්‍රාථමිකය මෙර් 20 ට වඩා අඩු වූ විට: ටීඑම් = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).
ප්‍රාථමිකය 20 mer ට වඩා වැඩි වූ විට: Tm = 81.5+0.41 × (GC%)-600/L, L යනු ප්‍රාථමිකයේ දිග වේ.
Ne වායුවේ උෂ්ණත්වය (Tm-5) ° C ලෙස සකසන්න.
PCR ප්‍රාථමික ආදානය
ප්‍රාථමික වල සුදුසු අවසාන සාන්ද්රණය 0.1 μM සහ 1.0 .M අතර තෝරා ගත හැකිය. ප්‍රයිමර් සාන්ද්රණය ඉතා අඩු වීම වර්‍ධන නිෂ්පාදන වල අඩු අස්වැන්නක් සඳහා හේතු වන අතර ප්‍රයිමර් සාන්ද්රණය අධික වීම විශේෂිත නොවන විස්තාරණයට වැඩි නැඹුරුතාවයක් දක්වයි. සාමාන්‍යයෙන් ඩීඑන්ඒ ප්‍රමාණය විශාල හෝ සංකීර්ණ සැකිලි ඩීඑන්ඒ (මානව ජෙනෝම් ඩීඑන්ඒ වැනි) සැකිල්ලක් ලෙස භාවිතා කරන විට ප්‍රාථමික සාන්ද්රණය අඩු විය යුතුය. ඩීඑන්ඒ ප්‍රමාණය කුඩා හෝ සරල අච්චු ඩීඑන්ඒ (උදා: ප්ලාස්මිඩ් ඩීඑන්ඒ ආදිය) සැකිල්ලක් ලෙස භාවිතා කරන විට ප්‍රාථමික සාන්ද්රණය වැඩි විය යුතුය.
සියලුම නිෂ්පාදන ODM/OEM සඳහා රිසිකරණය කළ හැකිය. විස්තර සඳහා,කරුණාකර අභිරුචි සේවාව (ODM/OEM) ක්ලික් කරන්න
  |
1 kb කැබැල්ලක් විස්තාරණය කිරීම සඳහා සැකිල්ල ලෙස ජෙනෝමික් ඩීඑන්ඒ භාවිතා කරන්න. පීසීආර් ප්‍රතික්‍රියාවෙන් පසු, විද්‍යුත් විච්ඡේදනය හඳුනා ගැනීම සඳහා 5 μl ගන්න. |
A-1 සැකිල්ල
Temp අච්චුවේ ප්‍රෝටීන් අපද්‍රව්‍ය හෝ ටාක් නිෂේධක ආදිය අඩංගු වේ - ඩීඑන්ඒ සැකිල්ල පිරිසිදු කරන්න, ප්‍රෝටීන් අපද්‍රව්‍ය ඉවත් කරන්න හෝ පිරිසිදු කිරීමේ කට්ටල සමඟ ඩීඑන්ඒ නිස්සාරණය කරන්න.
Temp සැකිල්ල අවලංගු කිරීම සම්පුර්ණ නැත ——අනුශ්‍රිත කිරීමේ උෂ්ණත්වය යෝග්‍ය ලෙස ඉහළ නංවන අතර විරේචනය කිරීමේ කාලය වැඩි කරයි.
Mp අච්චු පිරිහීම ——අච්චුව නැවත සකස් කරන්න.
ඒ -2 ප්‍රයිමර්
ප්‍රයිමර් වල දුර්වල ගුණාත්මකභාවය ——ප්‍රථමකය නැවත සංස්ලේෂණය කරන්න.
■ ප්‍රාථමික පිරිහීම —— සංරක්‍ෂණය සඳහා ඉහළ සාන්ද්‍රණ ප්‍රයිමර් කුඩා පරිමාවක් බවට පත් කරන්න. බහු ශීත කිරීම සහ දියවීම හෝ දිගු කාලීන 4 ° C ක්‍රියෝප්‍රීසර්වඩ් කිරීමෙන් වළකින්න.
ප්‍රයිමර් වල නුසුදුසු සැලසුම (උදා: ප්‍රයිමර් දිග ප්‍රමාණවත් නොවීම, ප්‍රයිමර් අතර සෑදු ඩිමර් ආදිය) -ප්‍රතිනිර්මාණ ප්‍රයිමර් (ප්‍රයිමර් ඩිමර් සහ ද්විතීයික ව්‍යුහය සෑදීමෙන් වළකින්න)
ඒ -3 මි.මී.2+සාන්ද්රණය
G මෙග්2+ සාන්ද්රණය ඉතා අඩුයි —— Mg නිසි ලෙස වැඩි කරන්න2+ සාන්ද්රණය: එම්ජී ප්‍රශස්ත කරන්න2+ ප්‍රශස්ත එම්ජී තීරණය කිරීම සඳහා 0.5 මි.මී.2+ එක් එක් සැකිල්ල සහ ප්‍රාථමිකය සඳහා සාන්ද්රණය.
A-4 සනීපාරක්ෂක උෂ්ණත්වය
ඉහළ උෂ්ණත්වය ඉහළ යාම සහ ප්‍රාථමිකය සහ සැකිල්ල බන්ධනයට බලපායි. ————————————————————————————————————————————————————22 ° C ක අනුක්‍රමණයකින් තත්වය වැඩි දියුණු කරන්න.
A-5 දිගු කිරීමේ කාලය
Extension කෙටි දිගු කාලය —— දිගු කිරීමේ කාලය වැඩි කිරීම.
සංසිද්ධි: samplesණාත්මක සාම්පල මඟින් ඉලක්කගත අනුක්‍රමික කලාප ද පෙන්වයි.
A-1 PCR දූෂණය වීම
Target ඉලක්කගත අනුපිළිවෙල හෝ විස්තාරණ නිෂ්පාදන වල හරස් දූෂණය - theණාත්මක සාම්පලයේ ඉලක්කගත අනුක්‍රමය අඩංගු නියැදිය නියමාකාරයෙන් නල මාර්ගයට ගෙන ඒම හෝ කේන්ද්‍රාපසාරී නලයෙන් පිටතට වත් නොකිරීම. පවතින න්‍යෂ්ටික අම්ල ඉවත් කිරීම සඳහා ප්‍රතික්‍රියාකාරක හෝ උපකරණ ස්වයංක්‍රීයව සවි කළ යුතු අතර negativeණාත්මක පාලන අත්හදා බැලීම් තුළින් අපවිත්‍ර වීමේ පැවැත්ම තීරණය කළ යුතුය.
Ag ප්‍රතික්‍රියාකාරක අපවිත්‍ර වීම —— ප්‍රතික්‍රියාකාරක ඉවත් කර අඩු උෂ්ණත්වයක ගබඩා කරන්න.
ඒ -2 ප්‍රයිම්r
G මෙග්2+ සාන්ද්රණය ඉතා අඩුයි —— Mg නිසි ලෙස වැඩි කරන්න2+ සාන්ද්රණය: එම්ජී ප්‍රශස්ත කරන්න2+ ප්‍රශස්ත එම්ජී තීරණය කිරීම සඳහා 0.5 මි.මී.2+ එක් එක් සැකිල්ල සහ ප්‍රාථමිකය සඳහා සාන්ද්රණය.
Pri නුසුදුසු ප්‍රාථමික සැලසුම සහ ඉලක්කගත අනුපිළිවෙලට ඉලක්ක නොවන අනුපිළිවෙල සමඟ සමජාතීයතාවයක් ඇත. ——ප්‍රාථමිකයන් නැවත සැලසුම් කරන්න.
සංසිද්ධි: පීසීආර් ඇම්ප්ලිෆිකේෂන් බෑන්ඩ් අපේක්‍ෂිත ප්‍රමාණයට නොගැලපේ, විශාල හෝ කුඩා හෝ සමහර විට විශේෂිත විස්තාරණ පටි සහ විශේෂිත නොවන විස්තාරණ පටි.
ඒ -1 ප්‍රයිමර්
Pri දුර්වල ප්‍රාථමික විශේෂතා
—— නැවත සැලසුම් කිරීමේ ප්‍රාථමිකය.
Pri ප්‍රාථමික සාන්ද්රණය ඉතා ඉහළයි ——අනුකරණය කිරීමේ උෂ්ණත්වය නියමිත ලෙස වැඩි කරන අතර විරේචනය කිරීමේ කාලය වැඩි කරයි.
ඒ -2 මිග්2+ සාන්ද්රණය
G එම්ජී2+ සාන්ද්රණය ඉතා ඉහළ ය —— Mg2+ සාන්ද්රණය නිවැරදිව අඩු කරන්න: එම්ජී උපරිම කරන්න2+ ප්‍රශස්ත එම්ජී තීරණය කිරීම සඳහා 0.5 මි.මී.2+ එක් එක් සැකිල්ල සහ ප්‍රාථමිකය සඳහා සාන්ද්රණය.
ඒ -3 තාප ස්ථායී පොලිමරේස්
En අතිරික්ත එන්සයිම ප්‍රමාණය —— 0.5 යූ කාල පරතරයන් තුළ එන්සයිම ප්‍රමාණය සුදුසු ලෙස අඩු කරන්න.
A-4 සනීපාරක්ෂක උෂ්ණත්වය
Neඅනෙහි උෂ්ණත්වය ඉතා අඩුයි ——අනුරූපී උෂ්ණත්වය යෝග්‍ය ලෙස වැඩි කිරීම හෝ අදියර දෙකක ඇනීමේ ක්‍රමය අනුගමනය කිරීම
A-5 PCR චක්‍ර
PCR චක්‍ර ඕනෑවට වඩා —— PCR චක්‍ර ගණන අඩු කරන්න.
ඒ -1 ප්‍රයිමර්————————————————————Oor නැතහොත් කූඩු කළ PCR සිදු කරන්න.
ඒ -2 ආකෘති ඩීඑන්ඒ
--— සැකිල්ල පිරිසිදු නැත ————————————————————————————————————
ඒ -3 මි.මී.2+ සාන්ද්රණය
——Mg2+ සාන්ද්රණය ඉතා ඉහළ ය —— Mg නිසි ලෙස අඩු කරන්න2+ සාන්ද්රණය: එම්ජී ප්‍රශස්ත කරන්න2+ ප්‍රශස්ත එම්ජී තීරණය කිරීම සඳහා 0.5 මි.මී.2+ එක් එක් සැකිල්ල සහ ප්‍රාථමිකය සඳහා සාන්ද්රණය.
A-4 dNTP
- ඩීඑන්ටීපී සාන්ද්රණය ඉතා ඉහළ ය - ඩීඑන්ටීපී සාන්ද්රණය නිසි පරිදි අඩු කරන්න
A-5 සනීපාරක්ෂක උෂ්ණත්වය
—————————————————————————————————————————————————————————————————
ඒ -6 පාපැදි
—————————————————————————————————————————————————————————————————————————
පළමු පියවර වන්නේ සුදුසු පොලිමරේස් තෝරා ගැනීමයි. නිතිපතා ටැක් පොලිමරේස් වලට 3'-5 'එක්සෝනියුක්ලීස් ක්‍රියාකාරිත්වය නොමැතිකම නිසා සෝදුපත් කියවිය නොහැකි අතර නොගැලපීම මඟින් කොටස් වල දිගු කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව බෙහෙවින් අඩු කරයි. එම නිසා නිතිපතා ටැක් පොලිමරේස් මඟින් 5 kb ට වඩා වැඩි ඉලක්ක කොටස් ඵලදායීව විස්තාරණය කළ නොහැක. දීර්ඝ කිරීමේ කාර්යක්ෂමතාව ඉහළ නැංවීම සහ දිගු කොටස් විස්තාරණ කිරීමේ අවශ්‍යතා සපුරාලීම සඳහා විශේෂ වෙනස් කිරීම් සහිත ටැක් පොලිමරේස් හෝ වෙනත් ඉහළ විශ්වාසවන්ත පොලිමරේස් තෝරා ගත යුතුය. ඊට අමතරව, දිගු කොටස් විස්තාරණය කිරීම සඳහා ප්‍රාථමික සැලසුම, විරූපණය කිරීමේ කාලය, දිගු කිරීමේ කාලය, ස්වාරක්ෂක පීඑච් යනාදිය ද ඊට අනුරූපව ගැලපීම අවශ්‍ය වේ. සාමාන්‍යයෙන් 18-24 බීපී සහිත ප්‍රයිමර් මඟින් හොඳ අස්වැන්නක් ලබා ගත හැකිය. සැකිල්ලට වන හානිය වළක්වා ගැනීම සඳහා, 94 ° C දී විරේචනය වීමේ කාලය එක් චක්‍රයකට තත්පර 30 ක් හෝ ඊට අඩු කළ යුතු අතර, විස්තාරණය වීමට පෙර උෂ්ණත්වය 94 ° C දක්වා ඉහළ නැංවීමේ කාලය මිනිත්තු 1 කට වඩා අඩු විය යුතුය. එපමණක් නොව, දිගු කිරීමේ උෂ්ණත්වය 68 ° C පමණ දක්වා සකස් කිරීම සහ දීර්ඝ කිරීමේ කාලය 1 kb/min අනුපාතය අනුව සැලසුම් කිරීමෙන් දිගු කොටස් වල ඵලදායී විස්තාරණය සහතික කළ හැකිය.
ඉහළ විශ්වාසවන්ත භාවයකින් යුත් විවිධ ඩීඑන්ඒ පොලිමරේස් භාවිතා කිරීමෙන් පීසීආර් විස්තාරණයේ වැරදි අනුපාතය අඩු කළ හැකිය. මෙතෙක් සොයාගෙන ඇති සියලුම ටාක් ඩීඑන්ඒ පොලිමරේස් අතර, පීඑෆ්යු එන්සයිමයේ අවම දෝෂ අනුපාතය සහ ඉහළම විශ්වාසවන්තභාවය ඇත (අමුණා ඇති වගුව බලන්න). එන්සයිම තෝරා ගැනීමට අමතරව, පර්යේෂකයන්ට පීසීආර් විකෘති අනුපාතය තවදුරටත් අඩු කළ හැකි අතර එමඟින් බෆර් සංයුතිය ප්‍රශස්ත කිරීම, තාප ස්ථායී පොලිමරේස් සාන්ද්රණය සහ පීසීආර් චක්‍ර අංකය ප්‍රශස්තිකරණය කිරීම ඇතුළත් වේ.
නිෂ්පාදන කාණ්ඩ
අපව තෝරා ගන්නේ ඇයි
අපගේ කර්මාන්ත ශාලාව පිහිටුවීමෙන් පසු මූලධර්මය පිළිපදිමින් පළමු ලෝක මට්ටමේ නිෂ්පාදන සංවර්ධනය කරමින් සිටියේය
පළමුව ගුණාත්මක. අපගේ නිෂ්පාදන කර්මාන්තයේ විශිෂ්ඨ කීර්ති නාමයක් ලබා ඇති අතර නව හා පැරණි පාරිභෝගිකයින් අතර විශ්වාසනීයභාවය අගය කරයි.
- දුරකථන: +86 010-59822688
- ගොඩනැගිල්ල 5, අංක 86, ෂුවාන්ගිං බටහිර පාර, චැංග්පිං දිස්ත්රික්කය, බීජිං.
- people@tiangen.com
